基于獨(dú)有的表面修飾技術(shù)，賽分SRT SEC柱提供眾多孔徑規(guī)格 (從100 Å到2000 Å) 以供用戶選擇。SRT SEC固定相在眾多的分離應(yīng)用中可實(shí)現(xiàn)高的分離及最大的回收率。其應(yīng)用領(lǐng)域涵蓋了生物大分子 (如蛋白質(zhì)和核酸)、生物小分子 (如縮氨酸和寡聚核苷酸)、天然高分子 (如多糖)、人造高分子、生物細(xì)胞 (如細(xì)菌和病毒)，以及納米粒子等。

SRT SEC柱蛋白分子量校正曲線

色譜柱： 7.8x300 mm, 5 µm

流動(dòng)相： 150 mM phosphate buffer, pH 7.0

流速： 1.0 mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng)： UV 280 nm

進(jìn)樣量： 10 µL

樣品： 1). Thyroglobulin, 670 kD; 2). g-Globulin, 158 kD; 3). BSA, 66 kD; 4). Ovalbumin, 44 kD; 5). Myoglobin, 17.6 kD; 6). Ribonuclease A, 13.7 kD; 7). B12, 1.35 kD; 8). Uracil, 120

　　體積排阻色譜中，填料的孔體積決定了色譜柱的最高容量?？左w積越大，柱容量就越高，分離效果也越好。賽分科技精心設(shè)計(jì)的SRT固定相具有大的孔體積，例如SRT SEC-150、300、500孔體積為1.3 ～ 1.5 mL/g，而SRT SEC-100、1000、2000的孔體積為1.0 ～ 1.1 mL/g。下圖顯示與競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手T的SEC柱相比，SRT SEC-150柱具有許多優(yōu)點(diǎn)。首先，SRT柱比T柱具有更高的分離容量。對(duì)于SRT柱和T柱，從全滲透峰 (尿嘧啶) 到全排阻峰 (甲狀腺球蛋白) 之間的洗脫體積分別為6.7 mL和6.17 mL。其次，SRT柱比T柱具有更高的分辨率。圖中聚-DL-丙氨酸為一種縮氨酸，平均分子量為1 ～ 5 kD (Sigma)。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)可知，體積排阻色譜柱中能達(dá)到基線分離的兩種物質(zhì)其平均分子量必須相差兩倍以上。SRT SEC-150可以很好地分離核糖核酸酶A (13.7 kD) 和聚-DL-丙氨酸，而T柱則不能實(shí)現(xiàn)基線分離。另外，SRT柱分離聚-DL-丙氨酸的完美峰形表明其對(duì)聚-DL-丙氨酸沒(méi)有非特異性作用。反之，T柱分離聚-DL-丙氨酸時(shí)的峰形變寬和拖尾現(xiàn)象則說(shuō)明該柱固定相與樣品之間存在某些非特異性結(jié)合作用。

相近孔體積的SRT SEC-150與某品牌T SEC柱的比較

色譜柱： SRT SEC-150, (5 µm, 7.8x300 mm)

流動(dòng)相： 150 mM PBS, pH 7

流速： 1.0 mL/min

溫度： Ambient (~23° C)

檢測(cè)波長(zhǎng)： UV 280nm

進(jìn)樣量： 10 µL

樣品： 1) Thyroglobulin, 670kD; 2) BSA monomer, 66 kD; 3) Ribonuclease A, 13.7 kD; 4) poly-DL-alanine, 1-5 kDa; 5) Uracil, 120 D. (All columns are brand new and equilibrated for >5 column volumes with mobile phase to get flat baseline. All samples run on same day)

　　上樣量是體積排阻色譜分離與純化的重要指標(biāo)。從下圖可以看到，以BSA作為目標(biāo)分子，賽分SRT分析柱的上樣量可以超過(guò)500 μg，說(shuō)明其具有高載量的特點(diǎn)。

BSA在SRT SEC-150色譜柱上的載量測(cè)試

色譜柱：SRT SEC-150, (5 µm, 7.8x300 mm)

流動(dòng)相：150 mM PBS, pH 8.5

流速：1.0 mL/min

進(jìn)樣體積：10 µL

檢測(cè)波長(zhǎng)：UV 214 nm

　　SRT SEC固定相的合成采用可控的表面化學(xué)修飾技術(shù)，其表面涂層高度重現(xiàn)，使得填料批次與批次之間有著良好的重現(xiàn)性，加之嚴(yán)格的裝柱工藝控制，確保了不同批次色譜柱之間的保留時(shí)間的差異在5%以內(nèi)。下圖是蛋白標(biāo)準(zhǔn)混合樣品在3個(gè)不同批次SRT SEC-150柱上分離得到的結(jié)果。其中核糖核酸酶A的保留時(shí)間差異最大，但也在2%以內(nèi)。

三個(gè)不同批次SRT SEC-150柱之間的對(duì)比圖譜

色譜柱： SRT SEC-150, (5 µm, 4.6x300 mm)

流動(dòng)相：150 mM phosphate buffer, pH 7.0

流速： 0.35 mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng)：UV 214 nm

溫度：Ambient (～23 ℃)

進(jìn)樣量：5 µL

樣品：1) Thyroglobulin (1.0 mg/mL), 2) BSA (1.0 mg/mL), 3) Ribonuclease A (1.0 mg/mL), 4) Uracil (2.5 mg/mL)

　　SRT SEC固定相表面具有一層極致密的親水、中性聚合物薄膜，可以阻止流動(dòng)相接觸薄膜內(nèi)側(cè)，防止薄膜脫落，即使在高流速下也能保持高的穩(wěn)定性。

SRT SEC色譜柱穩(wěn)定性測(cè)試

色譜柱： SRT SEC-300, (5 µm, 7.8x300 mm)

流動(dòng)相： 250 mM NaCl in 100 mM sodium phosphate, pH 7.0

流速： 1.7 mL/min

樣品：Monoclonal antibody

　　SRT SEC固定相在pH 2.0到8.5之間均具有高的穩(wěn)定性。下圖表明，在用700柱體積的磷酸緩沖液 (pH 8.5)沖洗后，SRT SEC-300的固定相幾乎沒(méi)有改變。

　　SRT SEC固定相可用于多種緩沖體系，如醋酸銨、磷酸鹽、Tris等。當(dāng)用150 mM的磷酸緩沖液 (pH 7.0)作為流動(dòng)相時(shí)，在45天內(nèi)進(jìn)樣100次保留時(shí)間的偏差在5%以內(nèi)。SRT SEC固定相可在高鹽濃度，如2.0 M下使用。另外，SRT SEC柱在有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、THF、DMF、DMSO等中也可使用。

SRT SEC柱pH 8.5條件下穩(wěn)定性的測(cè)試

色譜柱： SRT SEC-300, (5 µm, 4.6x300 mm)

流動(dòng)相： 150 mM PBS, pH 8.5

流速： 0.35 mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng)： 214 nm

進(jìn)樣量： 3 µL

樣品： 1) Thyroglobulin, 2) BSA, 3) Ribonuclease A, 4) Uracil

　　SRT SEC固定相為中性親水固定相。蛋白和其他生物分子與SRT柱固定相之間幾乎沒(méi)有非特異性相互作用。蛋白不會(huì)吸附到硅膠基質(zhì)表面，因此SRT色譜柱對(duì)蛋白具有高的回收率，且能保持很好的活性。例如，在分離酸性蛋白BSA以及堿性蛋白溶菌酶的過(guò)程中樣品回收率大于95%。